pcr中cdna的作用(cDNA是干什么用的)

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cDNA是干什么用的
cDNA 互补脱氧核糖核酸
为具有与某mRNA(信使RNA)链呈互补的碱基序列的单链DNA即complementary DNA之缩写,或此DNA链与具有与之互补的碱基序列的DNA链所形成的DNA双链。与RNA链互补的单链DNA,以其RNA为模板,在适当引物的存在下,由依赖RNA的DNA聚合酶(反转录酶)的作用而合成,并且在合成单链cDNA后,在用碱处理除去与其对应的RNA以后,以单链cDNA为模板,由依赖DNA的DNA聚合酶或依赖RNA的DNA聚合酶的作用合成双链cDNA。真核生物的信使RNA或其他RNA的cDNA,在遗传工程方面广为应用。在这种情况下,mRNA的cDNA,与原来基因的DNA(基因组DNA,genomic DNA)不同而无内含子;相反地对应于在原来基因中没有的而在mRNA存在的3′末端的多A序列等的核苷序列上,与exon序列、先导序列以及续序列等一起反映出mRNA结构。cDNA同样可以被克隆。
为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA
你做的是不是RT-PCR, 这个就是以反转录得到的cDNA为模板的。
我们做的时候一般是提取植物总的RNA,然后采用Oligo(dT)或随机引物利用逆转录酶反转录成cDNA。再以cDNA为模板进行PCR扩增,主要是获得目的基因或检测基因表达,判断目的基因mRNA转录水平的相对量的变化。因为直接提取DNA的话,并不能证明该基因在其他细胞体内进行表达,通过这种方法可以克服假阳性。仅供参考。
为什么跑PCR要用CDNA,而不用本身的DNA呢
那要看你想要扩增的是什么基因片段了。cDNA是由RNA反转录而来。
有直接用基因组DNA跑PCR,为了是得到基因组本身的DNA片段或做DNA检测等;
而用cDNA扩增是为了得到基因的外显子片段或者检测目的基因是否表达等,这样制备的DNA片段还可用于目的基因的过表达等。
T载体克隆为什么要用cDNA
T载体可以克隆任何DNA片段。
它的目的是后续测序,以便连接到表达载体表达蛋白,所以多数情况下用cDNA。
但是也可以基因组测序分析用,扩增16SrRNA就是基因组扩增后T载体克隆测序。。

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